Рост и развитие рыб  представляет собой  две стороны единого  и  взаимосвязанного процесса формирования организма, обусловленного накоплением клеточных структур, внеклеточных образований с анатомо-морфологической и физиологической дифференциацией клеток, тканей и органов. В биологическом смысле  данный процесс выражается в увеличении массы, размеров и объема клеток, тканей и органов, с одной стороны и  физиолого-морфологической специализации —  с другой. Рост осуществляется в процессе увеличения размеров и деления клеток и представляет собой увеличение их массы и числа.

Развитие, в узком, биологическом смысле, определяется размножением и дифференциацией клеток, а в более широком понятии — показывает скорость протекания биохимических и физиологических процессов, а также   морфологические  особенности формирования тканей и органов. Если рост отражает количественные изменения,  то развитие показывает их  качественную сторону.   

Для успешного осуществления  этой задачи нами разработан уникальный способ повышения рыбопродуктивности  в тепловодных и прудовых предприятиях, основанный на использовании Пробиотической кормовой добавки (ПКД) Амилоцин № 3. ПКД Амилоцин №3 — единственный отечественный, запатентованный и зарегистрированный в установленном порядке препарат, разрешенный для применения в рыбоводстве без ограничений. Штаммы препарата ПКД Амилоцин №3 не являются генетически измененными, модифицированными  (продуктом генной инженерии). Выпускается ПКД Амилоцин №3 в сухой концентрированной  форме, устойчивой к баротермическому воздействию (гранулированию и экструдированию). В условиях интенсивного производства, когда на ограниченных площадях концентрируется большое поголовье животных, птицы, рыб, постоянное применение кормовых антибиотиков с неизбежностью приводит к селекции и последующей циркуляции в хозяйствах условно-патогенных и патогенных микроорганизмов с повышенной резистентностью к антибиотикам. Устранить эту циркуляцию, по-видимому, можно только пробиотиками,  корректирующими микробиологический баланс в кишечнике. И хотя впервые такая коррекция, как известно, была осуществлена И.И. Мечниковым еще в 1903 году путем введения в кишечник молочно-кислых бактерий, до последнего времени не удавалось найти достаточно эффективные виды бактерий для этих целей.

В природных условиях микробиологический баланс в кишечнике животных поддерживается, главным образом, природными бактериями и оказывается весьма устойчивым.

Поэтому нами для разработки корректирующих пробиотиков были выбраны штаммы аэробных Bacillussubtilis и анаэробных бактерий Bacilluslicheniformis. Оказалось, что штаммы этих бактерий могут обладать четко выраженной антагонистической активностью к широкому спектру патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Помимо этого Bacillussubtilis и Bacilluslicheniformis выделяют в кишечнике биологически активные вещества, продуцируют различные пищеварительные ферменты. В результате улучшается пищеварение, повышается усвоение кормов, увеличиваются среднесуточные привесы, стимулируется рост животных, птицы, рыб.

Действующим началом ПКД Амилоцин №3 являются штаммы Bacillussubtilis В-11966 и Bacilluslicheniformis  В-11965.

Штаммы паспортизованы, зарегистрированы  и депонированы ООО «Арлен» во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИГенетика (г.Москва) и запатентованы в Федеральном Институте Промышленной собственности (Патент РФ № 2184774, приоритет 21.09.2014г., Патент РФ № 2203947, приоритет 26.10.2014г., положительное решение по заявке № 2002129937, приоритет 11.10.2014).

Пробиотик одобрен Советом по ветеринарным препаратам Департамента ветеринарии Минсельхоза РФ (Протокол № 2 от 15.05.2014г.), утверждено Наставление по его применению в ветеринарии (ПВР № 001260-ОП).

Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ 22.10.2014г. утверждены Технические условия на производство ПКД Амилоцин №3   (ТУ 9291-001-20945808-14).

Жидкую форму пробиотикаиспользуют путем смачивания корма непосредственно перед кормлением.

Сухая форма пробиотикапредставляет собой сыпучий порошок, который удобно добавлять в комбикорма и премиксы, использовать в промышленном производстве гранулированных, экструдированных и экспандированных кормов. Основная часть бактерий ПКД Амилоцин №3находится в споровой форме, поэтому пробиотик сохраняет жизнеспособность при воздействии разнообразных агрессивных факторов (антибиотики, химиопрепараты, повышенная кислотность, высокие температуры, обработка острым паром), когда любые другие виды пробиотиков погибают.

Пробиотик не разрушаясь проходит в кишечник; он устойчив к флавомицину, канамицину, другим антибиотикам; пробиотик сохраняет жизнеспособность в течение нескольких часов при температурах, по крайней мере, +115°С, с другой стороны, допускается его замораживание. Пробиотик характеризуется высокой степенью безопасности и безвредности, даже при тысячекратных передозировках.

Эффективность действия его заключается в активном заселении кишечника рыбы B.subtilis иB.licheniformis, обеспечивающего  необходимую коррекцию микрофлоры (вытесняются патогенные и условно патогенные микроорганизмы). Особо следует подчеркнуть, что наиважнейшим  следствием этого процесса представляется продуцирование  бактерией практически всего спектра  пищеварительных ферментов (протеаз, липаз, амилаз), что является необходимой основой для использования пробиотика  на первых этапах подращивания личинок рыб, когда пищеварительная система их еще несовершенна и, зачастую, недоразвита. B.subtilis иB.licheniformis, как генераторы ферментов, обеспечивают  интенсивную дезинтеграцию компонентов пищи и их активное всасывание через кишечную стенку в кровь. Способствует стимуляции клеточных и гуморальных факторов иммунитета. Продуцируются жизненно необходимые аминокислоты и физиологические субстраты, активизируются  специфические  и неспецифические системы защиты макроорганизма (повышается резистентность). Нормализуется пищеварение, повышается иммунный статус и  устойчивость организма к стрессовым факторам (пересадка и перемещение рыбы, замена корма, предупреждения вздутия кишечника у осетровых рыб, гидрохимические аномалии и т.д.) и различным заболеваниям инфекционной, инвазионной и алиментарной  этиологии. Приведенными вышеперечисленными аргументами, по-видимому, и можно объяснить  тот высокий прирост  биомассы при выращивании рыб, который мы получаем при использовании пробиотиков серии Пробиотик.

Межведомственная ихтиологическая комиссия Министерства природных ресурсов РФ, Госкомитета Российской Федерации по рыболовству и Российской Академии Наук рекомендовала рыбоводным хозяйствам России Пробиотик в качестве кормовой добавки для карпа, осетра и форели (Решение № 1-46/8 от 15.01.2015г.).

Задачей настоящей работы являлось изучение феномена транслокации бактерий из пищеварительной системы рыб, как одного из возможных механизмов действия споро-образующего  ПКД Амилоцин №3.

Экспериментальный раздел работы выполнен на гуппи  и карпах  в аквариальных условиях. Цель исследований – использование спорообразующего пробиотика «Пробиотик» для лечения гнойно- воспалительных процессов,  профилактики раневойх инфекции, дисбактериозов и энтеритов различной этиологии. Для этого, в различных вариантах в полость пищеварительного тракта рыб с кормом вводили живые культуры сенной палочки, предварительно меченные 3Н-тимидином. Отдельным рыбам были нанесены резаные  раны мягких тканей, плавников,  проведена скарификация  чешуйчатого покрова, вызван локальный некроз кишечника. Проводилось лечение гнойно-воспалительных процессов современными антибиотиками и ПКД Амилоцин №3. После выведения  рыб из опыта исследовались различные ткани путем изготовления гисторадиографических препаратов. Наряду с клиническими наблюдениями и традиционным комплексом клинических и гематологических анализов выполнялись посевы для изучения состава микрофлоры из ран, крови, почек, печени, селезенки и  кожи.

Оказалось, что живые бактерии сенной палочки , примерно 1 из  500, при введении их в пищеварительный тракт рыбы проникают в кровь, накапливаются в селезенке, почках, печени, области очагов воспаления или других раневых повреждений. В тканях,  в зависимости от  места их нахождения, бактерии сохраняют жизнеспособность от нескольких часов до нескольких суток.    

Выживаемость травмированных рыб в тех вариантах, где им предварительно давали пробиотик, составляла от  75 до 95 %, в то время как в контрольном варианте, где рыбы его не получали, оказалась не выше 15 %. Гибель таких рыб, в основном,  была следствием сапролегниоза. Регенерация плавников,  скарифицированной чешуи и  кожи у рыб получавших ПКД Амилоцин №3  проходила в два раза быстрее, чем у выживших после аналогичных повреждений  в контрольных вариантах.             

Механизм действия, как известно, заключается в том, что  в очаге повреждения бактерии выделяют биологически активные вещества (антибиотики, протеолитические и сахаролитические ферменты, иммуномодуляторы и др.) и могут оказывать выраженное лечебное действие, а разрушаясь, бактерии служат источником антигенов для поддержания нормального уровня антител. Важно, что сенная палочка не оказывает повреждающего действия на ткани, напротив, стимулирует регенераторные процессы.

В настоящее время в мировой литературе транслокация бактерий  расценивается как патологический процесс, развивающийся вследствие стресса, иммунодефицита, интоксикации, гематологических заболеваний.

Полученные нами результаты позволяют сделать вывод, что транслокация бактерий пробиотика может быть естественным защитным механизмом, который целесообразно использовать в рыбоводной практике, применяя ПКД Амилоцин №3  не только для борьбы с инфекционными болезнями и  дисбактериозами, но и для профиликтики и лечения раневых повреждений рыб, что важно при транспортировке, пересадках, перевозках, когда травматизм неизбежен.

Препарат был получен и использован в экспериментах с икрой и личинками рыб в виде жидкой культуральной формы. Концентрация инокулята в 1 мл препарата превышала 10 млрд. кл./мл. Для того, чтобы определить концентрационный эффект препарата, в опытах с оплодотворенной икрой и личинками рыб доза вносимого препарата составляла от 5 до 15 мл на 1000 экземпляров.